人 (Human) 血小板活化因子乙酰水解酶 (PAFA) ELISA 檢測試劑盒
本試劑僅供研究使用  標(biāo)本：血清或血漿

試驗原理：
PAFA試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知PAFA濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進行檢測。先將PAFA和生物素標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中PAFA的濃度呈比例關(guān)系。

試劑盒內(nèi)容及其配制
試劑盒成份（2-8℃保存）    96孔配置    48孔配置    配制
96/48人份酶標(biāo)板    1塊板（96T）    半塊板（48T）    即用型
塑料膜板蓋    1塊    半塊    即用型
標(biāo)準(zhǔn)品：1600U/L    1瓶（0.6ml）    1瓶（0.3ml）    按說明書進行稀稀
空白對照    1瓶（1.0ml）    1瓶（0.5ml）    即用型
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液    1瓶（5ml）    1瓶（2.5ml）    即用型
生物素標(biāo)記的抗PAFA抗體    1瓶（6ml）    1瓶（3.0ml）    即用型
親和鏈酶素-HRP    1瓶（10ml）    1瓶（5.0ml）    即用型
洗滌緩沖液    1瓶（20ml）    1瓶（10ml）    按說明書進行稀釋
底物A    1瓶（6.0ml）    1瓶（3.0ml）    即用型
底物B    1瓶（6.0ml）    1瓶（3.0ml）    即用型
終止液    1瓶（6.0ml）    1瓶（3.0ml）    即用型
標(biāo)本稀釋液    1瓶（12ml）    1瓶（6.0ml）    即用型

自備材料
蒸餾水。
加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性
避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

操作注意事項
試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

樣品收集、處理及保存方法
血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液
保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準(zhǔn)備
標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準(zhǔn)備，不能儲存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行：
1600 U/L    （6號標(biāo)準(zhǔn)品）    原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。
800 U/L    （5號標(biāo)準(zhǔn)品）    100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
400 U/L    （4號標(biāo)準(zhǔn)品）    100ul的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
200 U/L    （3號標(biāo)準(zhǔn)品）    100ul的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
100 U/L    （2號標(biāo)準(zhǔn)品）    100ul的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
50 U/L    （1號標(biāo)準(zhǔn)品）    100ul的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
0 U/L    （空白對照）    原始濃度不用稀釋直接加入50ul。

洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

人 (Human) 血小板活化因子乙酰水解酶 (PAFA) ELISA 檢測試劑盒操作步驟
使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。
甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
在450nm波長處測定各孔的OD值。

建議使用的實驗方案
    標(biāo)準(zhǔn)品濃度（U/L）    
A    1600    1600    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品
B    800    800    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品
C    400    400    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品
D    200    200    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品
E    100    100    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品
F    50    50    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品
G    0    0    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品
H    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品    樣品

局限
6號標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到的結(jié)果。

試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性：不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

人 (Human) 血小板活化因子乙酰水解酶 (PAFA) ELISA 檢測試劑盒結(jié)果判斷與分析
1、儀器值：于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的PAFA標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的PAFA含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。
3、檢測值范圍：0-1600U/L
4、敏感度： 1.0 U/L
A02242    大鼠可溶性Toll樣受體2(sTLR2)酶聯(lián)免疫試劑盒    ，英文名：    Rat soluble Toll-like receptor 2,sTLR-2 ELISA Kit    ，規(guī)格：    96T/48T
A02243    大鼠前列腺素F2α(PGF2α)酶聯(lián)免疫試劑盒    ，英文名：    Rat Prostaglandin F2α,PGF2α ELISA Kit    ，規(guī)格：    96T/48T
A02244    大鼠白三烯E4(LTE4)酶聯(lián)免疫試劑盒    ，英文名：    Rat leukotriene E4,LT-E4 ELISA Kit    ，規(guī)格：    96T/48T
A02245    大鼠尿激酶(UK)酶聯(lián)免疫試劑盒    ，英文名：    Rat urokinase,UK ELISA Kit    ，規(guī)格：    96T/48T
A02246    大鼠凝血因子Ⅻ(FⅫ)酶聯(lián)免疫試劑盒     ，英文名：    Rat coagulation factor Ⅻ,FⅫ ELISA Kit    ，規(guī)格：    96T/48T
A02247    大鼠凝血因子ⅩⅢ(FⅩⅢ)酶聯(lián)免疫試劑盒    ，英文名：    Rat coagulation factor ⅩⅢ,FⅩⅢ ELISA Kit    ，規(guī)格：    96T/48T
A02248    大鼠凝血因子Ⅲ(FⅢ)酶聯(lián)免疫試劑盒    ，英文名：    Rat coagulation factor Ⅲ,FⅢ ELISA Kit    ，規(guī)格：    96T/48T
A02249    大鼠載脂蛋白H(Apo-H)酶聯(lián)免疫試劑盒     ，英文名：    Rat Apolipoprotein H,Apo-H ELISA Kit    ，規(guī)格：    96T/48T
A02250    大鼠白介素2受體(IL-2R)酶聯(lián)免疫試劑盒     ，英文名：    Rat Interleukin-2 receptor,IL-2R ELISA Kit    ，規(guī)格：    96T/48T
A02251    大鼠腎上腺髓質(zhì)素(ADM)酶聯(lián)免疫試劑盒     ，英文名：    Rat adrenomedullin,ADM ELISA Kit    ，規(guī)格：    96T/48T
A02252    大鼠β內(nèi)啡肽受體(β-EPR)酶聯(lián)免疫試劑盒    ，英文名：    Rat Beta-Endorphin receptor,β-EPR ELISA Kit    ，規(guī)格：    96T/48T
A02253    大鼠鈣/鈣調(diào)素依賴性蛋白激酶2(CAMK 2)酶聯(lián)免疫試劑盒    ，英文名：    Rat calcium/calmodulin-dependent protein kinase-Ⅱ,CAMK 2 ELISA Kit    ，規(guī)格：    96T/48T
A02254    大鼠肝脂酶(HL)酶聯(lián)免疫試劑盒    ，英文名：    Rat hepatic lipase,HL ELISA Kit    ，規(guī)格：    96T/48T
A02255    大鼠煙堿型乙酰膽堿受體(N-AChR)酶聯(lián)免疫試劑盒    ，英文名：    Rat nicotinic acetylcholine receptor,N-AChR ELISA Kit    ，規(guī)格：    96T/48T
A02256    大鼠毒蕈堿型乙酰膽堿受體(M-AChR)酶聯(lián)免疫試劑盒     ，英文名：    Rat muscarinic acetylcholine receptor,M-AChR ELISA Kit    ，規(guī)格：    96T/48T
A02257    大鼠活化蛋白C(APC)酶聯(lián)免疫試劑盒    ，英文名：    Rat activated protein C,APC ELISA Kit    ，規(guī)格：    96T/48T
A02258    大鼠甘丙肽/甘丙素(GAL)酶聯(lián)免疫試劑盒    ，英文名：    Rat galanin,GAL ELISA Kit    ，規(guī)格：    96T/48T
A02259    大鼠α葡萄糖苷酶(a-Glu)酶聯(lián)免疫試劑盒    ，英文名：    Rat α-Glucosidase,a-Glu ELISA Kit    ，規(guī)格：    96T/48T
A02260    大鼠破骨細(xì)胞分化因子(ODF)酶聯(lián)免疫試劑盒    ，英文名：    Rat osteoclast differentiation factor,ODF ELISA Kit     ，規(guī)格：    96T/48T
A02261    大鼠Toll樣受體9(TLR-9/CD289)酶聯(lián)免疫試劑盒     ，英文名：    Rat Toll-like receptor 9,TLR-9 ELISA Kit     ，規(guī)格：    96T/48T
A02262    大鼠鉤端螺旋體IgG(Lep IgG)酶聯(lián)免疫試劑盒     ，英文名：    Rat Leptospira IgG,Lep IgG ELISA Kit     ，規(guī)格：    96T/48T
A02263    大鼠熱休克因子1(HSF1)酶聯(lián)免疫試劑盒    ，英文名：    Rat Heat Shock Factor 1,HSF1 ELISA Kit     ，規(guī)格：    96T/48T
A02264    大鼠β羥丁酸(βOHB)酶聯(lián)免疫試劑盒    ，英文名：    Rat Beta-Hydroxybutyric Acid,β-OHB ELISA Kit     ，規(guī)格：    96T/48T
A02265    大鼠細(xì)胞色素P450(CYP450)酶聯(lián)免疫試劑盒    ，英文名：    Rat cytochrome P450,CYP450 ELISA Kit    ，規(guī)格：    96T/48T
A02266    大鼠生長激素釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)酶聯(lián)免疫試劑盒     ，英文名：    Rat growth hormone releasing peptide-Ghrelin,GHRP-Ghrelin ELISA Kit     ，規(guī)格：    96T/48T
A02267    大鼠內(nèi)臟脂肪特異性絲氨酸蛋白酶抑制劑(vaspin)酶聯(lián)免疫試劑盒     ，英文名：    Rat Visceral adipose-specific serine protease inhibitor,vaspin ELISA Kit     ，規(guī)格：    96T/48T
A02268    大鼠溴脫氧核苷尿嘧啶(BrdU)酶聯(lián)免疫試劑盒     ，英文名：    Rat Bromodeoxyuridine,BrdU ELISA Kit     ，規(guī)格：    96T/48T
A02269    大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)酶聯(lián)免疫試劑盒    ，英文名：    Rat transforming growth factorsβ2,TGFβ2 ELISA Kit     ，規(guī)格：    96T/48T
A02270    大鼠細(xì)胞色素P4502E1(CYP2E1)酶聯(lián)免疫試劑盒     ，英文名：    Rat cytochrome P450 2E1,CYP2E1 ELISA Kit    ，規(guī)格：    96T/48T
A02271    大鼠α1微球蛋白(α1-MG)酶聯(lián)免疫試劑盒    ，英文名：    Rat α1-microglobulin,α1-MG ELISA Kit    ，規(guī)格：    96T/48T
A02272    大鼠單核細(xì)胞趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)酶聯(lián)免疫試劑盒     ，英文名：    Rat monocyte chemotactic protein 4,MCP-4 ELISA Kit     ，規(guī)格：    96T/48T
A02273    大鼠過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)酶聯(lián)免疫試劑盒    ，英文名：    Rat peroxisome prolifeRators activator receptors alpha,PPAR-α ELISA Kit    ，人 (Human) 血小板活化因子乙酰水解酶 (PAFA) ELISA 檢測試劑盒規(guī)格：    96T/48T
A02274    大鼠鈣調(diào)素(CAM)酶聯(lián)免疫試劑盒     ，英文名：    Rat calmodulin,CAM ELISA Kit     ，規(guī)格：    96T/48T
A02275    大鼠載脂蛋白E(Apo-E)酶聯(lián)免疫試劑盒    ，英文名：    Rat Apolipoprotein E,Apo-E ELISA Kit    ，規(guī)格：    96T/48T
A02276    大鼠網(wǎng)膜素(omentin)酶聯(lián)免疫試劑盒    ，英文名：    Rat omentin ELISA Kit    ，規(guī)格：    96T/48T